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CD69:淋巴細胞活化最早表達的分子,作為多向性調控者參與血液和自身免疫疾病!

日期:2023-05-24 09:51:03

近日,《Theranostics》雜志在線發表了題為HSF1 promotes CD69+Treg differentiation to inhibit colitis progression的研究論文 [1]。研究發現,CD69在維持Treg免疫抑制功能中起重要作用,Treg中敲低CD69容易誘發炎癥性腸病等自身免疫性疾病。此外,HSF1通過激活CD69轉錄促進CD69+Tregs分化,這對Tregs的免疫抑制功能至關重要。尤其是對于治療自身免疫性疾病的患者來說,通過增加CD69+Treg的數量將有望緩解疾病癥狀,改善病情進展。

CD69作為淋巴細胞活化最早表達的分子,也就是當免疫系統激活時,CD69成為最早的信號,調節T細胞、B細胞、自然殺傷細胞等多種免疫細胞的功能,因此,CD69被認為是一種多向性調控者,在免疫系統中發揮著重要的作用。越來越多的研究表明,CD69在血液和免疫疾病中發揮重要的調節作用。那么,CD69更多的生物學功能是怎樣的?它在免疫調節中的機制是如何?帶著疑問,讓我們去一起了解探索。


1. 什么是CD69?

1.1 CD69的結構

CD69(又稱AIM,EA-1,Leu23和MLR-3)是淋巴細胞活化最早表達的膜表面分子。人CD69是由199個氨基酸組成的完整的II型跨膜糖蛋白 [2],包括40個殘基的細胞內區,21個殘基的跨膜區和138個殘基的細胞外區。細胞外區有C-型凝集素(Ca2+依賴性糖基識別區域(CRD)),CD69亦屬于C-型凝集素受體家族 [3-4]。細胞內的末端Ser/Thr通常被磷酸化,CD69與CD23CD72有相同性 [3-4]。CD69又屬于NK細胞特異的遺傳因子復合體,不同的是,NKR-P1、Ly-49與NKG2分子只表達在NK細胞上,而CD69可在多種細胞上表達,說明CD69有多種特性 (圖1[2]

CD69結構示意圖

圖1. CD69結構示意圖 [2]

1.2 CD69的表達及功能

CD69是淋巴細胞激活后最早表達的表面抗原,后來發現經誘導后它幾乎可在所有的血細胞上表達。CD69可誘導表達在T細胞、B細胞、NK細胞、單核細胞、中性和嗜酸性粒細胞、胸腺細胞等。CD69這種僅在細胞活化后表達的特性,使其成為細胞活化的標記分子。例如,T細胞活化標志分子,具有代表性的:IL-2受體CD25、轉鐵蛋白受體CD71、CD69,而CD69是表達最早的分子 [5-7]

CD69也可作為細胞共刺激信號,如CD69+T細胞伴隨IL-12βIL-18α和IL-16β mRNA水平增高,并在重組IL-12或IL-18的作用下,促進干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的產生。近年研究揭示CD69在促進細胞活化的同時,還可能與細胞的凋亡密切相關 [8-9]。雖然CD69的配體還未明確,有研究提示CD69可能與Galectin-1(Gal-1)結合調控Th17(圖2[8]。總之,CD69交聯可產生細胞內信號傳導及多種免疫反應,對造血細胞的生物學功能有廣泛的作用。

CD69結構示意圖

圖2. CD69可能與Galectin-1(Gal-1)結合調控Th17 [8]


2. CD69在細胞活化和凋亡中的雙向免疫調節機制

CD69是一個多向性的免疫調節分子,對多種造血細胞的活化和分化具有重要作用。CD69自被發現后,初始研究基本上是關于CD69在細胞活化中的作用。近年來發現,CD69在T細胞凋亡中亦有重要作用。CD69介導細胞活化和細胞凋亡的分子機制仍不明確。

2.1 CD69和細胞活化

靜止狀態的T細胞不表達CD69,但當T細胞受抗CD3/TCR(T cell receptor,TCR)、CD2CD28、蛋白激酶C(PKC)的激活物PMA、PHA等刺激活化后可誘導性表達CD69。

在CD69介導的T細胞活化中CD3/TCR復合體是必要的(圖3[10]。PMA通過激活GTP連接和Ras蛋白參與了細胞內的信號傳遞,這對于T細胞上CD69的表達起到了核心作用。

CD69介導的T細胞活化中CD3/TCR復合體是必要的

圖3. CD69介導的T細胞活化中CD3/TCR復合體是必要的 [10]

NK細胞在靜止狀態也不表達CD69,當IL-2IL-7IL-12、IFNA、PMA和CD16交聯可使NK細胞活化,誘導CD69的表達 [10-11]。多種不同信號轉導中的蛋白激酶 C(protein kinase C,PKC)和蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)參與其中 [10-11]。CD69啟動的NK細胞細胞毒活性受CD94的調節 [12];另有報道CD69能活化細胞外信號調節激酶ERK,而CD69啟動的ERK活化受CD94/NKG2-A抑制性受體的負調節 [13]

對脾臟和淋巴結中的B細胞,脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)可誘導其CD69分子表達;對外周血液中嗜酸性粒細胞EOS,體外IL-2、IL-3IL-5IL-13GM-CSF、IFN-γ可誘導CD69表達 [14-15]

2.2 CD69和細胞凋亡

CD69在體內與細胞的凋亡密切相關。在體內活化的具有CD69高表達的T細胞,在體外易于快速自發凋亡。與死亡受體CD95相比,CD69介導的凋亡有其自己的特點。CD95介導的凋亡幾乎涉及所有細胞類型,而明確可由CD69介導的凋亡細胞為T細胞、活化的嗜酸性粒細胞EOS和單核細胞。

研究提示CD69介導的單核細胞凋亡與3個不同的信號通路相關:1)依賴于NO;2)與磷脂酶A2/磷脂氧化酶級聯反應相關;3)受百日咳毒素(PTX)敏感的G蛋白影響;4)CD69介導TGF-β合成 [16]

Caspase是一類在細胞凋亡過程中起關鍵作用的分子。EOL-1株EOS在CD45、CD45R、CD45RB、CD95、CD69單抗培養后,凋亡增加,caspase-8caspase-9抑制劑可抑制單抗誘導的凋亡;CD69交聯可誘導caspase-3、caspase-8激活。抗CD69單抗可誘導EOS凋亡及bcl-2表達下降,但在粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子GM-CSF存在,胞內bcl-2濃度不變時,CD69單抗可誘導GM-CSF培養的CD69+細胞凋亡,bcl-2表達下降,提示CD69誘導的凋亡與bcl-2依賴的信號轉導有關 [17]

成熟T細胞活化誘導凋亡機制可能是FAS,研究發現,體內激活的具有CD69高表達的扁桃腺T細胞體外易于自發性和快速凋亡,細胞趨化因子CXCL12/SDF-1、TIL16、IL17、IL12、IL15等可抑制凋亡;磷酸酰肌醇3激酶(PI3K)抑制劑可加速凋亡,提示體內激活CD69+T細胞有內源性的凋亡敏感性的增加,而其機制涉及多種外源信號 [18]


3. CD69在疾病中的作用

CD69作為T淋巴細胞激活后最早表達的表面分子,是T細胞介導的免疫應答的重要組成。當其表達之后,可通過提高Ca2+濃度、上調細胞內TNF-α、IFN-γ等細胞因子的分泌以及IL-2及其受體的合成與表達,并作為共刺激信號促進T細胞進一步活化和增殖。現有研究表明,CD69對多種血細胞的激活、增殖和分化起重要作用,并與血液系統疾病及免疫相關性疾病的發病機理有關。

3.1 CD69和血液系統疾病

在多種血液系統惡性腫瘤(包括淋巴瘤、急性或慢性白血病、多發性骨髓瘤)外周血淋巴細胞亞群中發現,CD4+和CD8+的T細胞上CD69、CD71等活化標志分子表達明顯增加,說明這類疾病存在T細胞激活。

急性髓系白血病((Acute myeloid leukemia,AML)起源于造血干細胞的異常增殖和分化。在AML中,白血病細胞不成熟并快速增殖,最終會取代正常造血組織,導致貧血、感染和出血等癥狀。在AML中,CD69表達率明顯降低。由于CD69的缺乏,一系列細胞因子,如IL2、TNF-α等分泌亦減低,難以形成效應T細胞而產生免疫應答。經化療獲得完全緩解后,CD69表達率則明顯升高,表明AML患者存在T細胞活化受抑、免疫功能受損 [19]

慢性淋巴細胞白血病(Chronic Lymphocytic Leukemia,CLL)是一種以CD5+CD19+B淋巴細胞克隆性增殖為特征的惡性增生性疾病。在CLL中,用絲裂原體外刺激B細胞,發現CD69的表達與正常對照相似,但CD95的上調性表達受損。進一步研究揭示CLL患者瘤細胞表達CD23,CD25,CD69,CD71等表面活化抗原,而CD69表達水平可能與CLL患者外周血淋巴細胞數目、更差的臨床分期等因素密切相關 [20]

在骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic Syndromes,MDS)單核細胞中,CD69的表達量明顯增加,這可能與MDS患者免疫功能失調有關。CD69的高表達可能會導致單核細胞對病原體的清除能力下降,從而使MDS患者更容易感染。

3.2 CD69和自身免疫相關性疾病

對于CD69的研究大都集中在系統性紅斑狼瘡、類風濕性關節炎等自身免疫性疾病上。這些研究發現CD69在自身免疫性疾病患者外周血中處于高表達狀態,經有效治療后,CD69表達水平明顯回落,且CD69水平與疾病的活動明顯相關。

系統性紅斑狼瘡(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)是以T、B淋巴細胞功能改變為特征的自身免疫性疾病。在刺激實驗中,SLE患者的淋巴細胞CD69表達比正常人群細胞呈高反應,且SLE病人淋巴細胞對多種刺激表現適度的增殖。然而,SLE患者CD4+和CD8+T細胞,CD69的表達無明顯差異,提示CD4+和CD8+T細胞的活化,均需CD69的參與,CD69所起的作用很可能是在活化早期傳遞活化信號 [22]

在類風濕性關節炎(Rheumatoid Arthritis,RA)滑膜液中,CD4+和CD8+T淋巴細胞CD69的表達均升高,表明這兩個T細胞亞群均被激活。對比RA、血清陰性脊柱關節病(SSd)和結晶體關節炎(CAA)三組患者在關節滑膜液中CD69的表達,發現CD69+淋巴細胞的百分比在三組患者中沒有差異,但是RA患者關節滑膜液中CD69表達水平最高。此外,RA組患者的淋巴細胞CD69表達與滑膜液IL-15水平相關 [23-24]

在自身免疫性心肌炎的小鼠中,CD69能通過調節心臟特異的Th17細胞來負性調節心肌炎癥。Th17細胞是一種免疫細胞,其參與了多種炎癥性疾病的發生和發展過程,包括心肌炎。在體內CD69能通過活化Jak3/Stat5通路調節T細胞向Th17細胞分化 [25]

CD69調節T細胞向Th17細胞分化

圖4. CD69調節T細胞向Th17細胞分化 [28]

3.3 CD69和其它疾病

有研究表明冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)患者的CD69、DKK-1IL-10IL-6、TC、TG、LDL高表達,并且隨著冠脈狹窄病變程度加重 [26-27]。早期研究還揭示,哮喘患者氣道中T細胞有CD69表達,在細胞激活后,CD69通過對TGF-β生成與分泌的調節來激發T細胞的凋亡 [28]。CD69誘導活化細胞凋亡功能為哮喘治療提供新思路。另有學者在實體瘤(胃癌、肝癌、大腸癌等)的研究中發現,患者外周血CD69表達水平明顯減低,并與腫瘤分期呈負相關,手術切除病灶或化療后,CD69表達水平則有所回升 [29-31]


4. 靶向CD69的研發藥物及臨床意義

最新的Pharmsnap數據顯示,GeneFrontier Corp.正在臨床前模型中驗證一款針對CD69的單克隆抗體藥物(GFC-101),可用于治療腸易激綜合征、類風濕關節炎以及呼吸障礙。作為細胞最早表達的激活蛋白,CD69可以引發一系列免疫反應。目前,更多干預CD69表達水平的藥物或抗體正在進一步研究中,例如,在治療CLL患者時,高表達CD69的瘤細胞不太容易受到苯達莫司汀(Bendamustine)的影響,相比之下,外周血細胞則更容易受到影響。預先使用B細胞受體抑制劑降低CD69水平可能有助于減少苯達莫司汀低應答病例的發生 [32]

此外,CD69的配體及生物功能等目前仍未探清。近期的研究表明,Gla-1可能是CD69的一種配體,與CD69分子胞外結構結合。這種Gla-1-CD69配受體結合方式代表了一條新的通路,可控制Th17介導的炎癥和炎癥帶相關組織損傷 [8]。最新研究發現CD69還可通過與S1PR1結合,激活S1PR1并導致其內化,在淋巴細胞活動中發揮重要的調節作用 [33]。隨著對CD69研究的深入,我們將獲得更多關于CD69的生物學功能和臨床應用方面的重要信息。未來,在血液病和自身免疫疾病治療中,有望開發以CD69為靶點的新型免疫治療方法。

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CD69 蛋白:

Recombinant Human Early activation antigen CD69(CD69),partial (Active)

Recombinant Human Early activation antigen CD69(Cd69),partial,Biotinylated

High Purity Validated
by SDS-PAGE

The purity was greater than 96.7% as determined by SDS-PAGE. (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.

Excellent Bioactivity Validated by Functional ELISA

Immobilized Human CD69 at 2μg/mL can bind Anti-CD69 recombinant antibody (CSB-RA004952MA1HU), the EC50 is 23.17-26.04 ng/mL

High Purity Validated
by SDS-PAGE

The purity was greater than 90% as determined by SDS-PAGE. (Tris-Glycine gel) Discontinuous SDS-PAGE (reduced) with 5% enrichment gel and 15% separation gel.

CD69 穩轉細胞株:


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