CAR-T療法是一種將患者自身的T細(xì)胞通過基因工程改造，使其表達(dá)特異性的嵌合抗原受體（CAR），從而增強(qiáng)其對(duì)癌細(xì)胞的識(shí)別和攻擊能力的免疫療法。該療法在一些惡性腫瘤，特別是在某些難治性血液癌癥的中展現(xiàn)出了驚人的療效。
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CAR生“萬物”：從CAR-T到CAR-X
隨著對(duì)免疫系統(tǒng)的深入了解，CAR技術(shù)的應(yīng)用范圍正不斷拓寬，新型CAR細(xì)胞療法的開發(fā)逐漸成為熱點(diǎn)，如CAR-NK、CAR-M、CAR-Treg和CAR-γδ等。相比CAR-T療法潛在的不良反應(yīng)和無法應(yīng)用于實(shí)體瘤治療的痛點(diǎn)，這些新型CAR細(xì)胞療法存在各自的優(yōu)勢(shì)，為免疫療法的蓬勃發(fā)展注入了新的活力。
CAR的基本結(jié)構(gòu)
無論是CAR-T，還是CAR-NK、CAR-M，它們都具有相似的CAR結(jié)構(gòu)。CAR結(jié)構(gòu)主要包括三個(gè)部分：胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。
胞外結(jié)構(gòu)域通常是一個(gè)單鏈可變片段（scFv），該片段由一個(gè)linker將抗體的可變重鏈（VH）和可變輕鏈（ VL）連接形成，用于識(shí)別腫瘤抗原；一段鉸鏈區(qū)將scFv與跨膜域相連，提供克服空間位阻的靈活性，以允許scFv進(jìn)入靶向表位；跨膜結(jié)構(gòu)域的主要功能是確保CAR穩(wěn)定嵌入細(xì)胞膜；胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域則包括共刺激結(jié)構(gòu)域和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，用于激活和增強(qiáng)免疫細(xì)胞的反應(yīng)。
Structural elements of a chimeric antigen receptor(CAR)
Rodríguez-Lobato LG, et al. Front Oncol. 2020.
為什么進(jìn)行CAR檢測(cè)？
目前，隨著越來越多的基于CAR技術(shù)的細(xì)胞療法進(jìn)入臨床研究階段，CAR表達(dá)部分的檢測(cè)作為藥物質(zhì)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，將直接影響治療效果，相關(guān)法規(guī)更是對(duì)CAR陽性率的檢測(cè)提出了明確要求。因此，為了確保從早研階段的CAR細(xì)胞制備和功能測(cè)試、CMC階段的細(xì)胞質(zhì)量和純度評(píng)估、臨床測(cè)試階段的細(xì)胞體內(nèi)監(jiān)測(cè)和PK研究等各個(gè)環(huán)節(jié)都能嚴(yán)格把控，開發(fā)準(zhǔn)確、簡便、通用的CAR陽性率檢測(cè)試劑顯得尤為重要。
現(xiàn)有的CAR的檢測(cè)方法比較
常見的CAR檢測(cè)方法包括針對(duì)人/小鼠IgG F(ab')2片段的多克隆抗體、抗獨(dú)特型抗體、Protein L等，雖然各有優(yōu)勢(shì)，但也存在一些局限性，如需要針對(duì)每個(gè)CAR設(shè)計(jì)特異性抗體，成本較高，只能用于檢測(cè)已知抗原等*。
| 檢測(cè)方法 | 檢測(cè)機(jī)制 | 優(yōu)勢(shì) | 劣勢(shì) |
|---|---|---|---|
| Anti-human F(ab')2 pAb 和Anti-mouse F(ab')2 pAb | 結(jié)合IgG F(ab')2 片段 |
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| Anti-idiotypic antibodies | 特異性結(jié)合scFv 抗原識(shí)別區(qū) |
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| rh-protein | 特異性結(jié)合scFv 抗原識(shí)別區(qū) |
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| Protein L | 結(jié)合抗體K輕鏈 |
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| 本司產(chǎn)品 Linker-specific mAbs |
檢測(cè)CAR連接子 |
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*Linker-specific monoclonal antibodies present a simple and reliable detection method for scFv-based CAR NK cells. Mol Ther Methods Clin Dev. 2024.
華美生物的linker-specific mAb產(chǎn)品
由于目前大多數(shù)CAR的構(gòu)建體都含有Whitlow或G4S linker的單鏈可變片段（scFv），Whitlow （GSTSGSGKPGSGEGSTKG）linker主要用于針對(duì)血液惡性腫瘤的CAR構(gòu)建，如CD19 CAR [1]，而G4S（glycine4-serine）linker 則常用于針對(duì)實(shí)體瘤抗原的CAR，如HER2和CEA [2]，若針對(duì)這兩種linker開發(fā)特異性單克隆抗體則可以檢測(cè)廣泛的CAR。基于此技術(shù)背景，華美生物現(xiàn)全新推出一組高效、通用性強(qiáng)的CAR陽性率檢測(cè)工具--抗Whitlow Linker抗體和抗G4S Linker抗體。
● 產(chǎn)品列表
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 克隆號(hào) |
|---|---|---|
| Whitlow linker Monoclonal Antibody | CSB-MA234468A0m | 18A3G5 |
| G4S linker Monoclonal Antibody | CSB-MA186062I1m | 11A12E7 |
| G4S linker Monoclonal Antibody | CSB-MA186062I2m | 12F11C10 |
| G4S linker Monoclonal Antibody | CSB-MA186062I3m | 14A10E7 |
● 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
- 針對(duì)連接子特異性結(jié)合：特異性識(shí)別連接子序列，避免了與CAR其他區(qū)域的非特異性結(jié)合。
- 避免假陽性：由于linker-specific mAbs不與血清中的IgG或其他蛋白質(zhì)結(jié)合，因此不會(huì)產(chǎn)生假陽性結(jié)果。
- 適用于大多數(shù)CAR： 大多數(shù)CAR都包含Whitlow或G4S 連接子，具有很強(qiáng)的通用性。
- 不受抗原特異性限制：不針對(duì)特定的抗原結(jié)合區(qū)域，可以檢測(cè)不同抗原的CAR。
- 直接用于流式細(xì)胞術(shù)：無需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)步驟，操作簡便，易于標(biāo)準(zhǔn)化。
- 兼容其他方法： 可以與其他檢測(cè)方法（如rh-proteins）結(jié)合使用，提高檢測(cè)的特異性和敏感性。
● 產(chǎn)品數(shù)據(jù)
（貨號(hào)： CSB-MA234468A0m）
Untransfected HEK-293F cells (green line) and transfected scFv-based Anti-CD19 CAR containing a Whitlow/218 linker stable cells (red line) were stained with anti-Whitlow linker antibody (2μg/1*106), washed and then followed by FITC-conjugated anti-Mouse IgG Fc antibody and analyzed with flow cytometry.
（貨號(hào)： CSB-MA234468A0m）
Immobilized scFv-based Anti-CD19 CAR recombinant antibody at 2 μg/mL can bind Anti-Whitlow linker antibody. The EC50 is 5.147 to 5.761 ng/mL.
（貨號(hào)： CSB-MA186062I1m）
Untransfected HEK-293F cells (green line) and transfected scFv-based Anti-CD19 CAR containing a G4S linker stable cells (red line) were stained with anti-G4S linker antibody (2μg/1*106), washed and then followed by APC-conjugated anti-Mouse IgG Fc antibody and analyzed with flow cytometry.
（貨號(hào)： CSB-MA186062I2m）
Immobilized Three recombinant proteins containing G4S linker at 2 μg/mL can bind Anti-G4S linker antibody. The EC50 is 10.03 to 17.44 ng/mL, 22.60 to 28.76 ng/mL and 6.478 to 10.27 ng/mL.
相關(guān)資源：
參考文獻(xiàn)：
[1] B-cell depletion and remissions of malignancy along with cytokine-associated toxicity in a clinical trial of anti-CD19 chimeric-antigen-receptor-transduced T cells. Blood. 2012.
[2] CAR-T cell potency: from structural elements to vector backbone components. Biomark Res. 2022.
