ROR1藥物研發(fā)熱潮：默沙東與石藥集團(tuán)的臨床試驗(yàn)新動(dòng)態(tài)
日期：2024-12-03 10:56:00
在腫瘤治療領(lǐng)域，ROR1已成為一個(gè)備受矚目的靶點(diǎn)，全球多家制藥企業(yè)正積極推進(jìn)ROR1新藥進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。近期，默沙東以27.5億美元收購(gòu)獲得的新藥Zilovertamab vedotin（MK-2140）臨床試驗(yàn)申請(qǐng)?jiān)俅潍@得受理，該藥物由人源化單克隆抗體UC-961與微管抑制劑MMAE通過蛋白水解可切割的連接子偶聯(lián)而成，能夠精準(zhǔn)靶向ROR1陽性腫瘤細(xì)胞并釋放細(xì)胞毒性藥物，有效抑制腫瘤生長(zhǎng)。MK-2140在治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤的臨床試驗(yàn)中已展現(xiàn)出積極的療效和生存期改善。石藥集團(tuán)的ROR1 ADC藥物SYS6005，其臨床試驗(yàn)申請(qǐng)已獲得中國(guó)國(guó)家藥監(jiān)局藥品審評(píng)中心（CDE）的受理，標(biāo)志著該藥物有望用于治療晚期實(shí)體瘤患者。SYS6005通過與腫瘤細(xì)胞表面的ROR1受體結(jié)合，利用細(xì)胞內(nèi)吞機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，并在溶酶體內(nèi)釋放毒素以殺傷腫瘤細(xì)胞。這些不僅表明ROR1靶向藥物的研究熱度，更顯示了ROR1在腫瘤治療中的重要潛力。目前，ROR1靶點(diǎn)藥物因其在臨床試驗(yàn)中的初步成功而備受期待，預(yù)示著未來可能為癌癥患者帶來新的治療選擇 [1-2]。
1. 什么是ROR1？
ROR1是受體酪氨酸激酶樣孤兒受體（ROR）家族成員之一，屬于I型受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK)家族。與核受體中的ROR家族不同，ROR是一類膜受體。它們與家族中的原肌球蛋白激酶受體家族(tropomyosin-related kinase, Trk)、骨骼肌特異性酪氧酸激酶樣受體家族(muscle specific knase, MuSK)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子酯氨酸激酶受體家族(neurotrophic tyrosine kinase receptor, NT-RTK)關(guān)系密切，由于ROR蛋白最初發(fā)現(xiàn)時(shí)配體未知，所以被定義為孤兒受體 [3]。
ROR家族的另一個(gè)成員是ROR2，ROR1與ROR2氨基酸序列的同源性達(dá)58%。其中ROR1又含有2種亞型：完整的細(xì)胞膜受體型ROR1以及截短型變異體。截?cái)嘈妥儺愺w主要分為無胞外結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1I與只含胞外結(jié)構(gòu)的可溶型ROR1 [4]。可溶型ROR1的表達(dá)在正常人與腫瘤患者中并無差異，血清中的表達(dá)量很低或者檢測(cè)不到，且與疾病的進(jìn)展和嚴(yán)重程度無關(guān)，而完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1在多種腫瘤組織特異性高水平表達(dá) [5]。后文中所提到的ROR1都是指完整結(jié)構(gòu)的膜結(jié)合型ROR1。
2. ROR1的結(jié)構(gòu)與功能
ROR1是一種跨膜受體酪氨酸激酶蛋白。ROR1編碼基因共2814bp，位于染色體1p31.3。ROR1膜蛋白由937個(gè)氨基酸組成，分子量約105 kDa。ROR1結(jié)構(gòu)在生物種間高度保守，如人與鼠的ROR1氨基酸序列同源性可達(dá)97%。如圖1所示，人源ROR1由一個(gè)胞外的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(Ig)、兩個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)域(FZD)、近膜kringle結(jié)構(gòu)域、單次跨膜結(jié)構(gòu)以及一個(gè)胞內(nèi)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域（TKD）、兩個(gè)絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域(S/TRD)和一個(gè)脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域（PRD）組成 [6]。
圖1. The structure of ROR1
*圖片參考文獻(xiàn)發(fā)表在Protein Cell上[6]。
免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和半胱氨酸富集結(jié)構(gòu)域與ROR1結(jié)合配體的功能相關(guān)。其中FZD結(jié)構(gòu)域由10個(gè)保守的半胱氨酸殘基和5個(gè)相應(yīng)的二硫鍵組成。FZD結(jié)構(gòu)還見于平滑肌家族受體（如Smo）、卷曲家族受體（如sFRP）、金屬羧肽酶Z（CPZ）、collagen α1 XVIII和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白 (LRP)。這些蛋白大都可以結(jié)合Wnt蛋白并參與Wnt通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。目前大量研究己經(jīng)證實(shí)ROR1也是通過FZD結(jié)合Wnt5a并激活非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路 [7] [8]。 Kringle結(jié)構(gòu)域在ROR家族中比較保守，由80個(gè)氨基酸組成 [9]。其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是含有三個(gè)由二硫鍵形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，這三個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)也參與了ROR受體識(shí)別Wnt蛋白的過程。
ROR的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域在生物體高度保守，和Trk、MuSK的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域極其相似。但ROR1蛋白在這段高度保守的區(qū)域內(nèi)存在某些氨基酸序列的改變,提示其胞內(nèi)激酶活性有可能發(fā)生改變。絲/蘇氨酸、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域是由絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域、脯氨酸富集結(jié)構(gòu)域、絲/蘇氨酸富集結(jié)構(gòu)域三個(gè)結(jié)構(gòu)域串聯(lián)而成。該區(qū)域存在潛在的磷酸化位點(diǎn)、與下游信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)。
3. Wnt5a/ROR1與腫瘤
目前關(guān)于ROR1信號(hào)傳導(dǎo)的主流說法是，ROR1可通過介導(dǎo)非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路（non-canonical Wnt pathways）的信號(hào)傳遞，在多種生理過程中發(fā)揮重要作用，其中包括調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、增殖、遷移、和細(xì)胞趨化，尤其是Wnt5a。Wnt5a是典型的非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的激活因子，參與NF-κB亞基p65的磷酸化，激活腫瘤細(xì)胞中NF-κB通路，促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲，EMT、癌轉(zhuǎn)移等。接下來，我們具體了解下ROR1是如何通過Wnt5a信號(hào)通路激活腫瘤細(xì)胞的。
Wnt5a/ROR1在多種癌癥中的高度表達(dá)。作為Wnt5a的受體，ROR1參與激活腫瘤細(xì)胞NF-κB通路。NF-κB通路是炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)控的掌舵者，在多種腫瘤類型中組成性激活。如圖2所示，Wnt5a激活受體ROR1或FZD5，導(dǎo)致Dvl2/3激活和Akt磷酸化。Akt繼而促進(jìn)IKKα磷酸化激活I(lǐng)KK復(fù)合體，IKK復(fù)合體負(fù)責(zé)IκBα降解和NF-κB亞基p65的磷酸化。磷酸化的p65轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核促進(jìn)包括Wnt5a在內(nèi)的靶基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。Wnt5a的分泌又促進(jìn)新一輪的自主反饋循環(huán)。自主反饋循環(huán)ROR1/Akt/p65通路的激活會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)促炎因子（如IL-6）和趨化因子（如CCL2）的分泌。
圖2. The diagram of Wnt5a/ROR1 signaling
此外，有多項(xiàng)研究已將ROR1的表達(dá)與YAP / TAZ轉(zhuǎn)錄的激活相關(guān)聯(lián)，從而增強(qiáng)腫瘤發(fā)生和化學(xué)耐藥性 [10] [11]。如圖3所示，Wnt5a與ROR1 / FZD復(fù)合物的結(jié)合，然后通過結(jié)合Gα12/13進(jìn)一步激活RhoA，從而抑制Lats1/2活性，進(jìn)而導(dǎo)致YAP / TAZ去磷酸化和核易位。易位到細(xì)胞核里的YAP/TAZ與TEAD結(jié)合后可以誘導(dǎo)涉及細(xì)胞增殖、干細(xì)胞自我更新和腫瘤發(fā)生基因的轉(zhuǎn)錄。增加的YAP/TAZ轉(zhuǎn)錄反過來又可以上調(diào)ROR1表達(dá)。
圖3. Crosstalk between Wnt5a-ROR1 signaling and YAP/TAZ pathway
*圖片參考文獻(xiàn)發(fā)表在Cells上[12]。
4. 靶向ROR1的臨床意義
ROR1靶向藥物的研究正在迅速發(fā)展，高達(dá)90多款臨床藥物在研，涉及多種藥物類型和治療機(jī)制，主要包括CAR-T細(xì)胞療法、ADC藥物、單克隆抗體等。
CAR-T藥物：以O(shè)NCT - 808和JCAR 024為例，通過基因工程技術(shù)對(duì)患者自身的T細(xì)胞進(jìn)行改造，使其表面表達(dá)能夠特異性識(shí)別ROR1的嵌合抗原受體（CAR）。當(dāng)回輸?shù)交颊唧w內(nèi)后，這些CAR - T細(xì)胞能夠精準(zhǔn)識(shí)別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的ROR1，從而激活T細(xì)胞的殺傷功能，直接對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)動(dòng)免疫攻擊，引發(fā)腫瘤細(xì)胞凋亡。
ADC藥物：如MK - 2140這類ADC藥物，由靶向ROR1的人源化IgG1單克隆抗體、可裂解連接子以及毒性載荷（如單甲基澳瑞他汀E，MMAE）組成。藥物首先通過抗體部分與腫瘤細(xì)胞表面的ROR1特異性結(jié)合，隨后被腫瘤細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。在細(xì)胞內(nèi)，連接子在特定酶的作用下發(fā)生裂解，釋放出毒性載荷MMAE，MMAE作為微管蛋白抑制劑，可干擾腫瘤細(xì)胞的微管功能，進(jìn)而抑制細(xì)胞有絲分裂，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。
單抗藥物：如ZILO-301（Zilovertamab）是一種人源化單克隆抗體，特異性地靶向ROR1。它能夠精確地識(shí)別并結(jié)合腫瘤細(xì)胞表面的ROR1受體。這種結(jié)合可能會(huì)觸發(fā)機(jī)體自身的免疫反應(yīng)。比如，激活補(bǔ)體系統(tǒng)，誘導(dǎo)補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性（CDC）作用，或者通過抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）機(jī)制，使免疫細(xì)胞（如自然殺傷細(xì)胞等）識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞。
這些藥物主要針對(duì)ROR1在腫瘤細(xì)胞中的異常高表達(dá)，涵蓋了血液系統(tǒng)惡性腫瘤（如白血病、淋巴瘤等）以及實(shí)體瘤（如乳腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等），有望為不同類型腫瘤患者提供新的治療策略。多家機(jī)構(gòu)，包括Oncternal Therapeutics、默沙東、勃林格殷格翰等，正在積極推動(dòng)這些藥物的研發(fā)，最高階段已處于臨床3期，預(yù)示著ROR1靶向藥物有望在不久的未來上市，為腫瘤精準(zhǔn)治療帶來重大突破，為癌癥患者提供新的治療選擇。
臨床研究表部分展示：
| 藥物 | 靶點(diǎn) | 藥物類型 | 在研適應(yīng)癥（疾病名） | 在研機(jī)構(gòu) | 最高研發(fā)階段 |
|---|---|---|---|---|---|
| Zilovertamab | ROR1 | 單克隆抗體 | 套細(xì)胞淋巴瘤 | 慢性淋巴細(xì)胞白血病 | University of California San Diego | University of California | Oncternal Therapeutics, Inc. | 臨床3期 |
| Zilovertamab vedotin | ROR1 x Tubulin | ADC | 彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤 | 復(fù)發(fā)性彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤 | B細(xì)胞淋巴瘤 | B細(xì)胞惡性腫瘤 | 慢性淋巴細(xì)胞白血病 | 濾泡性淋巴瘤 | 套細(xì)胞淋巴瘤 | 難治性彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤 | 播散性彌漫性大 B 細(xì)胞淋巴瘤 | 膀胱癌 | 伯基特淋巴瘤 | 尤文肉瘤 | 神經(jīng)母細(xì)胞瘤 | 前體B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞白血病 | 實(shí)體瘤 | 急性淋巴細(xì)胞白血病 | 急性髓性白血病 | 邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤 | T細(xì)胞淋巴瘤 | 巨球蛋白血癥 | Merck Sharp & Dohme Corp. | 默沙東研發(fā)（中國(guó)）有限公司 | Merck Sharp & Dohme LLC | Merck & Co., Inc. | 臨床2/3期 |
| CAR T-cell therapy(Peking University) | ROR1 | 自體CAR-T | 晚期惡性實(shí)體瘤 | 中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九二〇醫(yī)院 | 北京大學(xué) | 臨床1/2期 |
| ROR1 CAR-T (Oncternal Therapeutics) | ROR1 | 自體CAR-T | 非霍奇金淋巴瘤 | 血液腫瘤 | 實(shí)體瘤 | Oncternal Therapeutics, Inc. | 臨床1/2期 |
| EMB-07 | CD3 x ROR1 | 雙特異性T細(xì)胞結(jié)合器 | 難治性淋巴瘤 | 肺腺癌 | 膀胱癌 | 乳腺癌 | 子宮癌 | 岸邁生物科技（蘇州）有限公司 | 臨床1期 |
| HDM-2005 | ROR1 | ADC | 難治性淋巴瘤 | 晚期惡性實(shí)體瘤 | 杭州中美華東制藥有限公司 | 臨床1期 |
| JCAR-024 | ROR1 | 自體CAR-T | 血液腫瘤 | 中美上海施貴寶制藥有限公司 | 臨床1期 |
| LCB-71 | ROR1 | ADC | 急性淋巴細(xì)胞白血病 | LigaChem Biosciences, Inc. | ABL Bio, Inc. | 無錫藥明合聯(lián)生物技術(shù)有限公司 | 基石藥業(yè)（蘇州）有限公司 | 臨床1期 |
| LYL-797 | ROR1 | CAR-T | 晚期乳腺癌 | Lyell Immunopharma, Inc. | 臨床1期 |
| NVG-111 | CD3 x ROR1 | 雙特異性T細(xì)胞結(jié)合器 | 慢性淋巴細(xì)胞白血病 | Novalgen Ltd. | 臨床1期 |
| PRGN 3007 | ROR1 | 自體CAR-T | 急性淋巴細(xì)胞白血病 | Precigen, Inc. | Precigen ActoBio, Inc. | 臨床1期 |
| ROR1-CAR-TILs(Guangdong Zhaotai InVivo Biomedicine) | HPK1 x PD-1 x ROR1 | CAR-TILs | 晚期惡性實(shí)體瘤 | 腦癌 | 廣東昭泰體內(nèi)生物醫(yī)藥科技有限公司 | 臨床1期 |
| ROR1R-CAR(The University of Texas MD Anderson Cancer Center) | ROR1 | CAR-T | 白血病 | The University of Texas MD Anderson Cancer Center | CLL Global Research Foundation | 臨床1期 |
| SYS-6005 | ROR1 | ADC | 實(shí)體瘤 | 石藥集團(tuán)巨石生物制藥有限公司 | 臨床申請(qǐng) |
| Anti-ROR1 antibody scFv conjugates(Oncternal) | ROR1 | ADC | 腫瘤 | University of California San Diego | Oncternal Therapeutics, Inc. | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| CN114539411 | ROR1 | 單克隆抗體 | 腫瘤 | 山東博安生物技術(shù)股份有限公司 | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| CN116410317 | ROR1 | ADC | 增生 | 腫瘤 | 四川科倫博泰生物醫(yī)藥股份有限公司 | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| NVG-333 | ROR1 | 自體CAR-T | 腫瘤 | Novalgen Ltd. | 藥物發(fā)現(xiàn) |
| ROR1 (生研生物) | ROR1 | CAR-T | 慢性淋巴細(xì)胞白血病 | 浙江生研生物科技有限公司 | 藥物發(fā)現(xiàn) |
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Immobilized ROR1 at 2 μg/ml can bind anti-ROR1 antibody (CSB-RA020067A1HU), the EC50 is 0.2450-0.3416 ng/mL.
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