elisa試劑盒中封閉液的作用及常用成分有哪些？
日期：2025-07-29 15:20:11
在ELISA實驗中，封閉液是確保檢測準確性的關鍵試劑之一，其作用和常用成分如下：
一、封閉液的核心作用
ELISA的固相載體（如微孔板）表面存在大量未被包被抗原 / 抗體占據的 “空白位點”，這些位點可能與后續加入的酶標抗體、樣本中的非特異性蛋白發生非特異性結合，導致背景信號升高（即 “假陽性” 或數值偏高）。
封閉液的作用是：利用惰性蛋白或其他分子與固相載體表面的空白位點結合，“封閉” 這些非特異性結合位點，從而降低背景干擾，提高檢測的特異性和信噪比。
二、常用封閉液成分及特點
封閉液的核心成分是能與固相載體結合的惰性物質，需滿足 “不與抗原 / 抗體發生特異性反應、能穩定占據空白位點” 的要求。常見類型包括：
1. 蛋白質類封閉液（最常用）
（1）牛血清白蛋白（BSA）
成分：通常為5%（w/v）BSA 溶液（溶于PBS或Tris緩沖液）。
特點：純度高、非特異性結合低，適用于多數 ELISA 檢測，尤其適合對干擾敏感的實驗。
注意：需使用無脂肪酸的BSA，避免脂肪酸對某些酶反應的抑制。
（2）脫脂奶粉（Skim Milk）
成分：通常為5%（w/v）脫脂奶粉溶液（溶于PBS或PBST）。
特點：成本低、封閉效果強，適用于多數常規 ELISA。
注意：含酪蛋白，可能與抗牛奶蛋白的抗體發生交叉反應，且不適用于生物素 - 親和素系統（奶粉中含生物素類似物）。
（3）胎牛血清（FBS）或正常動物血清
成分：通常為10%（v/v）血清溶液（溶于緩沖液）。
特點：血清中含多種惰性蛋白，封閉效果全面，適合復雜樣本（如血清、組織勻漿）的檢測。
注意：需使用與二抗來源不同的動物血清（如二抗為兔源，可選用山羊血清），避免交叉反應。
2. 非蛋白質類封閉液
（1）聚乙烯吡咯烷酮（PVP）
成分：1-5% PVP溶液（溶于緩沖液）。
特點：不含蛋白，適用于對蛋白敏感的檢測系統（如某些酶標記實驗），或避免蛋白污染的場景。
（2）明膠（Gelatin）
成分：0.5% 明膠溶液（溶于緩沖液，需加熱溶解）。
特點：成本低，適合部分固相載體的封閉，但封閉效果弱于 BSA 或奶粉。
3. 緩沖液基礎
上述封閉液通常需溶解在緩沖液中（如PBS、Tris-HCl），部分會添加0.05% Tween-20（表面活性劑），以增強封閉效果并減少非特異性結合。
三、選擇原則
封閉液的選擇需根據實驗體系（如抗原 / 抗體類型、樣本性質）調整：
常規檢測優先選5%脫脂奶粉（經濟高效）或 1-5% BSA（低干擾）；
生物素 - 親和素系統避免用脫脂奶粉，改用 BSA；
樣本含高濃度非特異性蛋白時，可嘗試正常動物血清；
需通過預實驗驗證封閉液的效果（如檢測空白孔的OD值，選擇背景最低的方案）。
總之，封閉液的核心目標是 “特異性封閉空白位點”，其選擇直接影響ELISA的靈敏度和準確性。
