gst標簽蛋白純化原理
日期：2023-07-27 14:39:58
GST標簽是一種常用的蛋白純化標簽，它利用谷胱甘肽轉移酶（GST）與谷胱甘肽（glutathione）之間的高親和力來純化目標蛋白。以下是GST標簽蛋白純化的原理：
構建融合蛋白：在目標蛋白的N端或C端連接GST標簽，構建GST-目標蛋白融合蛋白。
細胞表達：將GST-目標蛋白融合基因導入宿主細胞，使其表達GST-目標蛋白融合蛋白。
細胞裂解：對表達的細胞進行裂解，釋放細胞內的蛋白質。
親和層析：使用谷胱甘肽瓊脂糖珠（如Glutathione Sepharose）或磁珠等含有谷胱甘肽結合物的柱子，將裂解的細胞提取物加載到柱子中。由于GST與谷胱甘肽的高親和力，GST-目標蛋白融合蛋白會與柱子上的谷胱甘肽結合物結合。
洗脫：通過洗滌步驟去除非特異性結合的蛋白質和雜質，保留結合的GST-目標蛋白融合蛋白。
解離：通過加入過量的還原劑、酸或其他解離條件，將GST-目標蛋白融合蛋白與谷胱甘肽結合物解離。
蛋白收集：收集解離后的目標蛋白，即純化得到的目標蛋白。
GST標簽蛋白純化原理的關鍵在于利用GST與谷胱甘肽之間的高親和力。谷胱甘肽作為固相材料，能夠選擇性地捕獲含有GST標簽的融合蛋白，而非融合蛋白等其他細胞組分。通過洗脫和解離步驟，目標蛋白可以從柱子上被分離和純化出來。這種方法簡單、高效，特別適用于大規(guī)模蛋白純化和高表達的目標蛋白。
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