抗體定制服務包括哪些內容？

日期：2024-11-18 13:11:15

抗體定制服務是一個較為復雜的領域，主要包括以下幾個方面的內容：

抗體類型定制有哪些？

1、單克隆抗體定制

抗原制備：首先需要客戶提供目標抗原或者服務方幫助客戶制備抗原。例如，如果目標是一種新型病毒蛋白，就需要通過基因工程表達系統（如大腸桿菌、哺乳動物細胞等）來生產足夠量的、具有免疫原性的抗原蛋白。

動物免疫：將抗原注射到合適的動物體內，最常用的是小鼠。根據抗原的性質和實驗要求，設計合理的免疫方案，包括免疫劑量、免疫途徑（如皮下注射、腹腔注射等）和免疫時間間隔等。例如，對于一些小分子抗原，可能需要與載體蛋白偶聯后再進行免疫，并且需要多次加強免疫來刺激免疫系統產生足夠的、針對目標抗原的 B 淋巴細胞。

細胞融合與篩選：在動物體內產生足夠的免疫反應后，取出脾臟細胞（其中含有產生抗體的 B 淋巴細胞）與骨髓瘤細胞進行融合。通過特殊的篩選培養基（如 HAT 培養基），篩選出融合成功的雜交瘤細胞。這些雜交瘤細胞既具有 B 淋巴細胞產生特異性抗體的能力，又具有骨髓瘤細胞無限增殖的特性。

單克隆抗體的生產與純化：篩選出能穩定分泌目標抗體的雜交瘤細胞株后，進行大規模培養。可以采用體外培養方式，如在細胞培養瓶或者生物反應器中培養；也可以將細胞接種到動物體內（如小鼠腹腔），讓其產生腹水來獲得大量抗體。最后，通過蛋白純化技術（如親和層析、離子交換層析等）得到高純度的單克隆抗體。

2、多克隆抗體定制

抗原準備工作同單克隆抗體：抗原的質量和特性同樣會影響多克隆抗體的質量。例如，對于復雜的抗原（如全細胞、組織提取物等），其成分的多樣性會導致動物產生針對多種抗原表位的抗體。

動物免疫策略調整：免疫動物的選擇范圍更廣，除小鼠外，還可以是兔子、山羊等。免疫劑量和時間間隔根據動物種類和抗原性質有所不同。一般來說，多克隆抗體的免疫周期可能相對較短，但需要考慮不同動物的免疫反應差異。

血清收集與抗體純化：在免疫過程結束后，收集動物血清。血清中含有多種抗體，是多克隆抗體的粗提物。可以通過鹽析、親和層析等方法對血清中的抗體進行純化，以滿足不同的實驗需求。例如，對于一些對抗體純度要求較高的實驗（如免疫組化），可能需要采用多種純化方法相結合，以去除血清中的雜質蛋白和其他無關成分。

3、抗體標記定制

熒光標記抗體定制：根據客戶的實驗需求，如細胞成像、流式細胞術等，選擇合適的熒光染料（如 FITC、PE、Cy3、Cy5 等）對抗體進行標記。標記過程需要精確控制反應條件，包括染料與抗體的比例、反應時間、溫度和 pH 值等，以確保標記效率和抗體活性。例如，在進行流式細胞術檢測細胞表面抗原時，需要使用熒光標記抗體，標記后的抗體能夠特異性地結合到細胞表面的目標抗原上，通過流式細胞儀檢測熒光信號，從而實現對細胞亞群的分析。

酶標記抗體定制：對于免疫檢測實驗（如 ELISA、免疫組化等），常用酶標記抗體來進行信號放大和檢測。常見的標記酶有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）。標記過程涉及到化學交聯方法，將酶分子與抗體分子共價結合，同時要避免影響抗體的抗原結合活性和酶的催化活性。例如，在 ELISA 實驗中，酶標記抗體與抗原 - 固定抗體復合物結合后，加入相應的酶底物，通過酶催化底物產生顏色變化來定量檢測抗原。

放射性同位素標記抗體定制：在一些特殊的醫學診斷和研究（如腫瘤的放射性免疫顯像）中，需要使用放射性同位素標記抗體。標記過程需要特殊的設備和技術人員操作，確保標記的準確性和安全性。例如，碘 - 131 標記的抗體可以用于甲狀腺癌的診斷和治療，利用抗體對甲狀腺癌細胞表面抗原的特異性結合，將放射性物質帶到腫瘤部位，實現對腫瘤的定位和治療。

4、抗體片段定制

Fab 片段定制：通過酶切完整抗體（如木瓜蛋白酶），可以獲得抗原結合片段（Fab）。定制過程包括選擇合適的酶切條件，以確保高效產生 Fab 片段，并且要通過純化步驟去除酶和其他雜質。Fab 片段具有完整抗體的抗原結合活性，但分子量較小，在一些組織穿透性要求高的實驗（如體內腫瘤成像）中有優勢。

F (ab')?片段定制：用胃蛋白酶酶切抗體可得到 F (ab')?片段，它含有兩個抗原結合位點，相對 Fab 片段在抗原結合上可能具有更強的親和力。在定制過程中同樣要關注酶切條件和后續純化，并且這種片段在某些免疫檢測中能夠減少非特異性結合，提高檢測的特異性。

5、抗體親和力成熟定制

定點突變技術：通過對抗體基因進行定點突變，改變抗體可變區的氨基酸序列，然后篩選出親和力提高的突變體。例如，根據抗體與抗原結合的晶體結構信息，確定可能影響親和力的關鍵氨基酸殘基，對其進行突變，構建突變體庫，再利用噬菌體展示、酵母展示等技術篩選高親和力突變體。

鏈替換技術：將抗體的輕鏈或重鏈進行替換，構建新的抗體組合，從中篩選出親和力增強的抗體。這一過程涉及到基因工程操作和高通量篩選方法，以快速篩選出具有理想親和力的抗體。例如，在噬菌體展示技術平臺上，將不同來源的輕鏈基因與固定的重鏈基因組合，構建輕鏈替換文庫，通過抗原篩選得到親和力更高的抗體。