雙特異性抗體制備流程
日期：2023-07-17 16:23:26
雙特異性抗體（Bispecific Antibodies）是一種能夠同時(shí)結(jié)合兩個(gè)不同抗原的抗體分子，用于治療疾病或進(jìn)行研究。下面是一般的雙特異性抗體制備流程：
設(shè)計(jì)：確定目標(biāo)抗原及其結(jié)構(gòu)和特性，并設(shè)計(jì)合適的雙特異性抗體結(jié)構(gòu)和連接方式。
基因工程：使用基因工程技術(shù)構(gòu)建含有兩個(gè)不同的抗體變量區(qū)（VH和VL）序列的基因組。這可以通過合成DNA片段、PCR擴(kuò)增、引物設(shè)計(jì)等方法完成。
連接：將兩個(gè)抗體變量區(qū)的基因組連接在一起，形成單個(gè)的雙特異性抗體基因。
表達(dá)載體構(gòu)建：將雙特異性抗體基因插入適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體中，如質(zhì)粒或病毒載體。該載體通常包括啟動(dòng)子、信號(hào)序列和選擇標(biāo)記等功能元素。
細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染：將構(gòu)建好的表達(dá)載體導(dǎo)入適當(dāng)?shù)募?xì)胞系統(tǒng)中，例如CHO細(xì)胞、HEK293細(xì)胞或其他真核細(xì)胞。通過細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染，使表達(dá)載體進(jìn)入細(xì)胞并開始抗體的合成。
蛋白表達(dá)與純化：經(jīng)過培養(yǎng)和表達(dá)后，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液。使用親和層析、凝膠過濾等技術(shù)對雙特異性抗體進(jìn)行純化和富集。
鑒定和驗(yàn)證：對純化的雙特異性抗體進(jìn)行質(zhì)量鑒定，如SDS-PAGE、Western blotting或ELISA等技術(shù)，以確定抗體的結(jié)構(gòu)和功能。
功能驗(yàn)證：進(jìn)行體外和/或體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證雙特異性抗體的生物活性和效果。
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